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杜馬斯定氮法(DumasMethod)在測(cè)定蛋白質(zhì)時(shí),實(shí)際上是通過測(cè)定樣品中的氮含量來間接計(jì)算蛋白質(zhì)的含量,因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是由氨基酸組成的,而氨基酸都含有氮元素。這種方法基于氮元素在高溫燃燒條件下轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓∟?)的原理,隨后通過檢測(cè)生成的氮?dú)饬縼泶_定氮元素的含量,并*終計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。
1.樣品準(zhǔn)備:
將待測(cè)飼料樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚?,如研磨成?xì)粉、干燥至恒重等,以確保樣品均勻且易于燃燒。
2.燃燒分析:
將處理好的樣品置于杜馬斯定氮儀的燃燒管中,在純氧或富氧環(huán)境中進(jìn)行高溫燃燒(通常溫度超過1000°C)。
燃燒過程中,樣品中的有機(jī)物質(zhì)(包括蛋白質(zhì))被氧化分解,氮元素以氮?dú)猓∟?)的形式釋放出來。
3.氣體分離與檢測(cè):
燃燒產(chǎn)生的混合氣體(包括氮?dú)?、二氧化碳、水蒸氣等)通過一系列的氣體分離裝置,如冷卻管、干燥劑等,以去除干擾氣體(如二氧化碳和水蒸氣)。
純凈的氮?dú)怆S后被引入檢測(cè)器(如熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD或質(zhì)譜儀MS)中進(jìn)行定量分析。
4.氮含量計(jì)算:
根據(jù)檢測(cè)器測(cè)得的氮?dú)饬浚Y(jié)合儀器的校準(zhǔn)曲線或計(jì)算公式,可以計(jì)算出樣品中氮元素的含量。
蛋白質(zhì)含量計(jì)算:
利用氮含量和蛋白質(zhì)的平均含氮量(通常為6.25%,這是一個(gè)基于常見蛋白質(zhì)的近似值)之間的關(guān)系,計(jì)算出樣品中的蛋白質(zhì)含量。
計(jì)算公式為:蛋白質(zhì)含量(%)=氮含量(%)×6.25。
注意事項(xiàng):
1.樣品的前處理對(duì)測(cè)定結(jié)果有很大影響,必須確保樣品均勻且完全燃燒。
2.燃燒過程中需要嚴(yán)格控制溫度和氧氣流量,以確保氮元素完全轉(zhuǎn)化為氮?dú)狻?/span>
3.氣體凈化步驟非常關(guān)鍵,必須徹底去除干擾物質(zhì),以避免對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生誤差。
4.測(cè)定過程中應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn),以確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5.杜馬斯定氮法具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn),因此在飼料、食品、化肥等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用
需要注意的是,雖然杜馬斯定氮法是一種廣泛應(yīng)用的蛋白質(zhì)測(cè)定方法,但它也存在一定的局限性。例如,它無法區(qū)分樣品中的蛋白質(zhì)氮和非蛋白質(zhì)氮(如硝酸鹽、亞硝酸鹽中的氮),因此在某些情況下可能會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)含量的高估或低估。此外,不同的蛋白質(zhì)其含氮量也可能有所不同,因此在實(shí)際應(yīng)用中可能需要根據(jù)具體情況對(duì)平均含氮量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
意大利VELP杜馬斯元素分析儀的優(yōu)勢(shì):
1.雙載氣系統(tǒng),可選擇氦氣和氬氣作為載氣,無縫選擇氬氣,可以降低與氦氣相關(guān)的成本。2.可在無參考?xì)怏w的情況下工作,確保了準(zhǔn)確性和精確度。
2.儀器由DUM SoftTM軟件驅(qū)動(dòng),只需3-4分鐘就能產(chǎn)生N/蛋白質(zhì)結(jié)果,完全不需要值守,并且支持云計(jì)算。3.可以同時(shí)裝載不同基質(zhì)的固體、半固體和液體樣品。4.市場(chǎng)上*低的氦氣LOD為0.001mgN,RSD低于0.5%(EDTA),保證了高精度的結(jié)果和出色的重復(fù)性。5.免維護(hù)的DriStepTM疏水閥是一種物理性的疏水閥,可以去除99%的水,減少了化學(xué)品的成本。
6.NDA702易于安裝,結(jié)構(gòu)極為緊湊,可節(jié)省實(shí)驗(yàn)室寶貴的工作臺(tái)空間。與濕化學(xué)N/蛋白質(zhì)測(cè)定方法相比,VELP Duma定氮技術(shù)極大地減少了浪費(fèi)。